Identification of ‘Candidatus Liberibacter asiaticus’, the Huanglongbing Bacterium, in Citrus from Colombia
Cargando...
Fecha
Título de la revista
ISSN de la revista
Título del volumen
Editor
Cenipalma
DOI
Resumen
Descripción
‘Candidatus Liberibacter’ spp. are the most prevalent microorganisms in the citrus plant, associated with citrus Huanglongbing, which are transmitted by psyllid vectors. In Colombia, the vector Diaphorina citri Kuwayama has been reported in different regions, but ‘Ca. Liberibacter asiaticus’ (CLas) has only been detected in insect vectors, not in citrus host plants. To identify the presence and quantify the pathogen in citrus tissues, we employed a combined strategy that involved three techniques based on polymerase chain reaction (PCR). First, we used endpoint PCR with specific primers for CLas (OI1/OI2c) to confirm the infection. Second, we used qPCR with specific primers CIT295a/CIT298 designed on 16S rDNA gene regions to quantify the pathogen load. Finally, we used droplet digital PCR (ddPCR) to determine the copy number of the pathogen in citrus tissues using the b-subunit of the ribonucleotide reductase gene (nrdB) that is specific to CLas. We identified the presence of CLas in citrus plants for the first time in Colombia and quantified its titer in the plant tissue. We employed ddPCR and qPCR to provide crucial information for the country’s disease management, control strategies, and general crop health
Las especies del género de bacterias Candidatus Liberibacter son los microorganismos más comunes presentes en las plantas de cítricos y están asociados con la enfermedad Huanglongbing (HLB) que se transmite por vectores psilidos. En Colombia, el vector Diaphorina citri Kuwayama ha sido reportado en diferentes regiones, pero Ca. Liberibacter asiaticus (CLas) solo se ha detectado en insectos vectores y no en plantas cítricas huésped. Para identificar la presencia y cuantificar el patógeno en tejidos cítricos se empleó una estrategia combinada, que involucro tres técnicas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En primer lugar, se utilizó PCR convencional con cebadores específicos para CLas (OI1/OI2c) para confirmar la infección. En segundo lugar, se empleó qPCR (PCR cuantitativa o PCR en tiempo real) con cebadores específicos CIT295a/CIT298, diseñados sobre regiones del gen 16S ADNr (ADN ribosomico), con el fin de cuantificar la carga del patógeno. Por último, se empleó PCR digital en gotas (ddPCR), con el propósito de determinar el número de copias del patógeno en tejidos cítricos, para lo cual se utilizó la subunidad β del gen de la ribonucleotido reductasa (nrdB), que es especifica de CLas. Se identifico por primera vez en Colombia la presencia de CLas en plantas cítricas y se cuantifico su título en el tejido vegetal. Se uso ddPCR y qPCR para proporcionar información crucial para la gestión de la enfermedad, el diseño de las estrategias de control y el mantenimiento de la sanidad de los cultivos en el país.
Las especies del género de bacterias Candidatus Liberibacter son los microorganismos más comunes presentes en las plantas de cítricos y están asociados con la enfermedad Huanglongbing (HLB) que se transmite por vectores psilidos. En Colombia, el vector Diaphorina citri Kuwayama ha sido reportado en diferentes regiones, pero Ca. Liberibacter asiaticus (CLas) solo se ha detectado en insectos vectores y no en plantas cítricas huésped. Para identificar la presencia y cuantificar el patógeno en tejidos cítricos se empleó una estrategia combinada, que involucro tres técnicas basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). En primer lugar, se utilizó PCR convencional con cebadores específicos para CLas (OI1/OI2c) para confirmar la infección. En segundo lugar, se empleó qPCR (PCR cuantitativa o PCR en tiempo real) con cebadores específicos CIT295a/CIT298, diseñados sobre regiones del gen 16S ADNr (ADN ribosomico), con el fin de cuantificar la carga del patógeno. Por último, se empleó PCR digital en gotas (ddPCR), con el propósito de determinar el número de copias del patógeno en tejidos cítricos, para lo cual se utilizó la subunidad β del gen de la ribonucleotido reductasa (nrdB), que es especifica de CLas. Se identifico por primera vez en Colombia la presencia de CLas en plantas cítricas y se cuantifico su título en el tejido vegetal. Se uso ddPCR y qPCR para proporcionar información crucial para la gestión de la enfermedad, el diseño de las estrategias de control y el mantenimiento de la sanidad de los cultivos en el país.
Palabras clave
Ca. Liberibacter asiaticus (CLas), PCR cuantitativa (qPCR), PCR digital en gotas (ddPCR), reacción en cadena de la polimerasa (PCR), tejido vegetal de cítricos, Ca. Liberibacter asiaticus (CLas), citrus plant tissue, droplet digital PCR (ddPCR), polymerase chain reaction (PCR), quantitative PCR (qPCR)